上次第一期發完之后，圈內很多朋友關注我們，很高興得到大家的認可。這次咱們繼續，前面鋪墊的話就少一點，多一些枯燥的數據解讀。

想做好創新藥項目的投資，必須要熟悉新藥的開發流程。上圖是新藥研發的大概流程圖，從上圖可以看出，新藥的開發可以簡單分為藥物發現階段、臨床前研究階段和臨床研究階段三大階段。本文將重點對后面兩大階段分別進行介紹：

臨床前研究階段（IND前）

對照藥物研發流程圖，處于該階段的項目已經成功跨越了藥物發現階段，藥物作用靶點明確且經過苗頭化合物、先導化合物篩選階段，屬于眾多化合物中活性最適合、DMPK、體內體外實驗驗證后最中意的一個或幾個，定為臨床前候選化合物（PCC）。

隨后，針對該化合物會開展大量的實驗研究，包括CMC（化學制造和控制），體外（酶學/細胞學）或者體內（動物）藥效學（PD），藥代動力學（PK），毒理學，制劑開發等多個環節。大多數創新藥企會參照VIC模式（風險投資+知識產權+CRO公司）進行新藥研發，將很多實驗外包給行業內知名的CRO公司，對于個別項目的自己做實驗的數據要格外注意。

化學、制造和控制

（CMC）

臨床前候選藥物的確定標志著新藥項目正式進入臨床前研究階段，那么API如何制備則是新藥研發第一步需要考慮的問題，因為它是藥物研究和開發的基礎，是藥物研發的起始階段。它決定了能否為后續藥物研發過程中藥理毒理、制劑、臨床等研究提供合格的API，也影響是否可以通過對工藝全過程的控制來保證生產工藝的穩定、可行，同時也制約著是否可以為上市藥品的生產提供符合要求的原料藥？

當然，這是一個不斷改進、完善的過程，始終貫穿于新藥研發的不同階段，從最初的藥物發現到藥物上市，新藥研發企業不可能在最開始就把它做到最好，這也是很不現實的。

通常情況下，第一批提供的API主要用于毒理學研究，要求是越快越好，成本并不是主要考慮因素。因此，只要合成路線能夠滿足毒理學研究用量，工藝研發部門就會采用。

但隨著項目的推進，工藝部門會繼續優化設計合成路線，以滿足從臨床I—III期試驗用藥與商業化的需求；同理，制劑部門首先也會以最簡單的形式給藥，完成毒理學研究，然后不斷完成處方工藝研究，開發出適合商業化的制劑工藝。

關注后續的生產工藝和開始時相比是否優化改進，目標化合物需要經過幾步合成路線完成？是否包含特殊或者嚴格苛刻的合成條件（無水無氧，高溫，高壓，劇毒等）？每一步的提純處理是否容易操作，最終實驗得率如何？工藝是否穩定，最大生產規模可以達到的級別臨床試驗中采用的劑型是什么？藥物穩定性如何等等。以上這些問題都是我們所關心的。

在盡調過程中，CMC并不算是工作重點，相對來說，了解該化合物結構思路設計來源更為重要。是在已上市藥物基礎上基于經典藥化設計改造還是其他（HTS, FBDD, DEL, virtual screening）？若為改造，和原來化合物的優劣勢比較在哪里？

藥代動力學

（Pharmacokinetics，PK）

通俗的說，藥代動力學研究的是身體對藥物做了什么；正式的說，它是通過體外和動物體內的研究方法，揭示藥物在體內的動態變化規律，獲得藥物的基本藥代動力學參數，闡明藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）的過程和特征。

創新藥一般選用兩種或兩種以上的實驗動物，其中一種為嚙齒類動物，另一種為非嚙齒類動物，最好與藥效或毒性研究所用動物一致，并且是與人代謝性質相近的動物。

這部分是我們在項目盡調過程中的重點內容，我們會關注擬推化合物PK試驗設計和所獲得的藥代動力學參數。

比如：實驗動物的種屬，是否雌雄各半，樣本量是否符合統計學要求，所得數據是否有性別差異？實驗動物給藥劑量分為幾組，具體劑量選擇的依據是什么，藥物在動物體內的動力學過程是否屬于線性？是否采用體外吸收模型（如Caco-2模型）研究藥物吸收機理及影響因素，食物是否影響藥物的吸收，藥物的生物利用度是多少？是否比較藥物在動物與人之間的血漿蛋白結合率差異？

若為治愈中樞神經系統的藥物，需要考慮它能否很好的穿透血腦屏障（BBB）？

事實上，所有的大分子和98％以上的小分子藥物都不能穿越完整的BBB，而且BBB的藥物外排泵（如Ｐ-糖蛋白），能將某些藥物主動排出腦組織。那么，如何判斷一個化合物能夠很好的穿透BBB進入腦組織而發揮治療作用呢，這就成為我們盡調核查的關鍵點。

一般項目方會提供一些比較單一的實驗數據，我們認為應該從多個維度的實驗多個方向去驗證：

1）大鼠單次口服給藥后的血漿和腦脊液中不同時間點的藥物濃度；

2）大鼠單次口服給藥后的血漿和腦組織中不同時間點的藥物濃度；

3）大鼠單次口服給予同位素標記的藥物后的血漿和腦組織中不同時間點的藥物濃度。最后三個獨立的實驗都得到關鍵數據——穩態時腦血分配系數（K p，uu），它可以來評估藥物進入CNS（中樞神經系統）的能力。

觀察藥物在動物和人肝微粒體內的代謝情況。如藥物的代謝是否具有明顯的種屬差異，明確藥物對細胞色素P450酶的誘導或抑制作用，了解藥物可能在代謝方面存在的相互作用。

對于臨床需長期給藥的藥物，更要注意重復給藥是否有蓄積傾向？

最后，藥物半衰期T1/2，達峰時間Tmax，最大血藥濃度Cmax，血藥濃度-時間曲線下面積（AUC），表觀分布容積V等多個參數也需要我們仔細去考量。

藥效學研究

（Pharmacodynamics，PD）

正式的說，藥效學是研究藥物對機體的作用及作用機制。通俗的說，藥效學關注的是藥物對身體做了什么。

動物藥效學實驗是臨床研究的基礎，藥物在無動物實驗數據的前提下，應用到臨床，勢必會對人體造成無法想象的傷害。所以，新藥研發會首先通過體內或體外藥效學實驗來提前預判藥物對某種疾病是否有效，安全窗范圍是多少，有哪些不良反應發生？

藥效學實驗采用隨機，對照，重復的原則開展，在藥物早期研發階段，我們會開展大量分子和細胞水平的研究，比如與受體的結合、對激酶的活性（包括特異性、可逆/不可逆性、時間依賴性等）以及對不同腫瘤細胞系細胞生長抑制的活性與靶向性等。

隨后，即開展動物藥效學研究，預測臨床適應癥、量效關系（有效暴露量、臨床劑量范圍等）、時效關系（臨床給藥周期）、給藥途徑、藥效指標等，分析影響藥效因素，幫助后期設計臨床試驗，都具有重要意義。

所以，這也是我們新藥項目盡職調查的重點內容。

以腫瘤藥物為例，我們需要關注藥物對目標適應癥做過哪些藥效學試驗，是否涵蓋體外和體內試驗？體外藥效學實驗中采用多少種細胞系，是否是業內公認或者大量文獻證實的細胞株？是否設置陽性對照和空白對照組，采用何種方法檢測和計算半數抑制濃度（IC50）？是否在選擇腫瘤細胞系時考慮到細胞的生長和增殖速率？試驗是否重復至少一次？

這里要插一個題外話，也是我們自己的思考，是否應該根據靶點生物學作用原理的不同，而選擇不同的作用評價指標？比如，BTK靶點是要強烈抑制封閉這個通路，所以要達到IC90這個效果比較好，IC50就不行。其他導致細胞凋亡的作用通路上的靶點可能IC50就OK了，用不著IC90。所以按照這個推導是不是CDK4/6靶點的就需要IC90這個指標更適合？因為這個靶點的作用是抑制細胞分裂在G1期，并不是殺傷細胞或者導致細胞凋亡。

而體內試驗是用于進一步考察藥物對特定類型腫瘤細胞的殺傷或抑制作用，探索藥物產生藥效作用的給藥劑量、途徑、頻率和周期等。此時需要關注體內試驗采用何種動物模型（CDX/PDX），腫瘤移植部位（皮下/原位），檢測指標和評價指標，統計學結論，以此來判斷化合物的有效性。

雖然，該藥效學實驗遵從既定原則設計完成，但其最終得到的實驗結果也具有一定的局限性。因為人和實驗動物之間存在種屬差異，臨床疾病和動物模型間也存在著差異，動物反應和人體表現之間也是有一定的差異。所以，在新藥開發歷程中，流行著這樣一句話：在小鼠體內成功治愈腫瘤已經有千萬次了……

毒理學研究（Toxicology）

通常情況下，新藥研發的臨床前和臨床階段都需進行藥物毒理學研究，而臨床前毒理研究包括急性毒性、重復給藥毒性、安全性藥理、特殊毒性(遺傳毒性、生殖毒性、致癌性)、毒代動力學、其他毒性(刺激性、過敏性、溶血性)，以及免疫毒性和依賴性等。

其研究目的是發現藥物的毒性反應的癥狀、出現持續和結束的時間、無毒性反應的劑量水平、毒性反應的劑量與藥效劑量的間距(即治療窗或安全范圍)有多大、毒性反應的性質與可逆性等。

為了加速新藥能及早驗證是否有療效，尤其是對一些抗癌藥，有些耗時費錢的毒理實驗（如致癌性、生殖毒性）是可容許在臨床試驗階段再進行。毒理學研究也是選擇兩種實驗動物（嚙齒類+非嚙齒類）進行研究，同藥效學與藥代動力學相一致。該部分也是屬于項目盡調的重點內容，其中一般藥理學是研究藥物對于心血管、呼吸、中樞神經系統的影響。

比如在心血管方面，我們會非常關注HERG IC50值，以此來判斷它的心臟安全性。那么HERG IC50是否有一個明確的界限來確定藥物的心臟毒性，比如大于30μM就一定沒有心臟毒性嗎，或者小于10μM就一定有心臟毒性嗎？這個不是絕對的，有大于30μM的藥后來也有產生毒性的，有小于10μM卻能獲批上市成藥的。所以這個HERG IC50是相對的參考值。大家可能就會迷惑了，既然都有可能，那么臨床前怎么來判斷和分析HERG值的指導意義呢？這個展開來講還是很多東西，以后我們會針對HERG寫個專題，大家保持關注即可。

其次，我們也會通過以上毒性實驗來判斷多大劑量/暴露量在動物上產生毒性作用？多大劑量/暴露量在動物上未產生毒性作用？所用的動物相關模型是否能預示人體毒性？毒性反應的表現和持續時間？毒性反應是否可逆？毒性靶器官或者靶系統是什么？所表現出的毒性是否是該類化合物可預期的？是否產生毒性代謝物？最后，我們也是通過以上毒性實驗得到MTD值，NOAEL值關鍵性數據，為后續進入臨床階段I期臨床試驗的初始給藥劑量提供依據。

制劑開發

制劑開發是藥物研發的一個重要環節。早期制劑研究并不需要完整的處方開發，所有研究圍繞毒理學研究和一期臨床時方便給藥即可，目的是將候選藥物盡快推向臨床。該部分內容所以也不會是項目盡調核查的重點，但隨著項目推進，給藥方式和處方研究就越來越全面。

比如，有的藥胃腸吸收很差，就需要開發為注射劑。有的藥對在胃酸里面會失去活性，就需要開發為腸溶制劑。有的化合物溶解性不好，也可以通過制劑部分來解決這個問題。

自己實驗室做的數據

有一些特別早期的項目，因為創始人是高校的教授，很多臨床前實驗并沒有委托CRO公司開展，而是在自己高校的實驗室依靠數屆學生共同完成，這樣既可以節省大量的費用，有廉價研究人員可以使用，也可以按計劃推進實驗進度，可謂一舉兩得。

當然，沒有任何人會認為這種方式是不可取或者不正確的。但是對于這類新藥項目，作為投資人，在項目盡調核查時，除了上面列舉的重點之外，我們一定要重視原始數據朔源，查看原始實驗記錄，以藥效學實驗為例，可從以下維度進行：實驗動物的選擇（數量/體重/性別），動物模型的建立（時間/方法/評估），成功建模動物的分組（原始評價指標監測與記錄），動物實驗流程（空白對照組/陽性對照組/實驗組，給藥方法，給藥周期，溶媒選擇等），實驗結果記錄與解讀，統計學結果，最終實驗結論等等。

只有這樣，才能全面真實地了解項目最初的狀態。之前我們盡調過一個項目，但是在盡調中卻發現：1）也沒有完全遵從既定的實驗方案，存在多處嚴重方案違背且沒有合理解釋；2）原始實驗記錄保存不完整。所以，實驗數據展示的效果就值得懷疑了，因為實驗條件發生了變化。

前面這些內容都統稱為臨床前研究，是藥物開發的第一階段。臨床前各個實驗的步驟可不是嚴格按照上述這個順序展開，而是一個相互包容、相互協調的關系。比如，原料藥工藝研發部門，完成毒理批樣品合成后，就必須立即開展合成路線的選擇，開發新的合成工藝，提供足夠量的原料藥以滿足制劑部門制劑研究用原料藥和后期開展I期臨床用藥的需求。因此，項目推進是否順利，就看各專業間的協調與配合是否密切了。

臨床研究階段（IND后）

當一個化合物通過了臨床前實驗后，需要向藥監部門FDA提交新藥臨床研究申請（IND），其主要目的是向FDA提供數據證明該藥物具備用于早期臨床試驗的合理性與安全性。

IND申請需要以下三個方面的基本信息：

（1）臨床前動物藥理/毒理學研究以及任何以往的人體應用經驗，可包括在美國以外的資料；

（2）生產信息，包括藥物產品的組成、生產工藝、生產商、穩定性和生產控制等信息；

（3）臨床試驗方案、研究員手冊、受試者的知情同意書、倫理委員會(IRB)的批準以及附上任何有關IND法規條例。在美國，FDA對IND審評時限規定為30天，在此期間沒有被駁回，那么該新藥就可以進行人體試驗。當然，對于IND的申請，FDA主要考慮的是安全性，這個大家要心知肚明。

市場上見多了項目，免不了遇到一些項目方吹噓自己的項目獲得了多少美國FDA的IND批準，本來圈內專業的人都是不搭理這茬的。但是有些投資人也愿意聽，還拿著這個東西上會說可以證明企業的技術實力，我們只能表示呵呵。

大多數新藥項目要完成1-3期所有臨床試驗，極少數新藥項目適用于FDA加速審批的綠色通道，針對某些臨床急需的疾病，無藥可治的可以在二期臨床時用替代終點或中期終點來作為臨床終點，進而實現提前上市，上市后繼續做臨床后續驗證。

這個在美國FDA叫Accelerated Approval，中國NMPA（我還是習慣叫CFDA，NMPA太拗口了）以前沒有，去年開始學習美國，臨床急需的可以提前上市，叫有條件性批準上市。

I期臨床試驗

簡單點說，Ⅰ期臨床試驗主要是圍繞患者耐受性和藥代動力學展開，當然也可以按照需要同步考察藥效學、食物影響、藥物間相互作用等。

這一階段的臨床試驗一般需要征集20－100名正常和健康的志愿者（對腫瘤藥物而言通常為腫瘤病人，但人數更少），在嚴格控制的條件下，給不同劑量（隨著對新藥的安全性了解的增加，給藥的劑量也逐漸提高，并可以多劑量給藥）的藥物試驗于志愿者，仔細監測藥物的血液濃度、排泄性質和任何有益反應或不良作用，以評價藥物在人體內的性質。

同時也要通過這一階段的臨床試驗獲得其吸收、分布、代謝和排泄以及藥效持續時間的數據和資料；以及藥物最高和最低劑量的信息，以便確定將來在病人身上使用的合適劑量。

結合大家關注較多的腫瘤領域，I期臨床試驗盡調核查的數據包括：

1）最大耐受劑量(MTD)或劑量限制性的毒性（DLT）是什么？ 

2）藥代動力學參數及其與藥效/毒性間的關系（PK/PD）如何？

3）是否可以為Ⅱ期臨床試驗的擬定受試人群、推薦劑量和給藥方法提供很好的依據？

比如，如果1期臨床中的多劑量遞增試驗，最大給藥劑量是100mg，bid，在該劑量下第14天藥代動力學結果顯示，其中前19小時的血藥濃度值都大大超過了1 μM，而該化合物在前期人的全血體外實驗中得到IC50 是在1 μM（注意這里是總的血藥濃度值，不是游離值），根據藥代動力學曲線保守估計，每天24小時中至少有19小時最低藥物濃度超過IC50，達到預期的人體有效治療濃度。這個時候至少可以知道了人體按照100mg，bid連續給藥，每天可實現19小時以上達到預期的目標藥效濃度。

然后根據該給藥劑量下出現的不良事件（AE）等級、數量及系統器官，來判斷是否還需要繼續遞增劑量。如果這個劑量對應的AE都是二級的，連三級都沒有。那么對于腫瘤適應癥來說給藥劑量肯定要繼續往上爬，因為還有足夠的安全窗去嘗試，每遞增一個劑量都意味著在二期的時候可以離達到臨床終點更進一步。

好了，我們舉舉反例。

之前有個項目也是在1期開展中，項目方也是宣傳他們的安全性有多高，起始劑量就從400mg開始，然后在入組的最開始的三個病人身上服藥后， 沒有任何明顯副作用，病人感覺良好。后來又爬到了900mg，還是很不錯。

表面上好像真的很好哦，然后看PK數據，暴露量也不低啊，好像安全窗還蠻高。其實仔細想一下，他這個化合物血漿蛋白結合率是99.7%，游離量非常低，PK數據得出來的血液中的總的血藥濃度雖然高，但是游離量太少，經過計算，離目標有效濃度還是有一定距離。所以這個所謂的高劑量如此安全，是假安全，離真正的坡頂還早呢。

二期臨床試驗的項目我們很少考察，基本上也不在我們的投資范圍內，真正好項目進展到了二期臨床，估值已經比較貴了，不適合我們的定位，可能適合其他類型的投資機構或者大藥企。所以這里就不分享二期臨床的盡調重點了。

我們可以提醒大家的是：不要被二期臨床試驗中部分患者的CR或者ORR的所謂驚艷數據所陶醉，有時候留心下細節，會發現療效和劑量非依賴性也是一個角度哦，從那個角度看過去也許是另外一番數據的解讀。這里就是點到為止，大家自己多琢磨。

好了，第二期我們就講到這。行文倉促，若有不對或不準確之處，還請各位專業人士給予指正。下期請關注專利盡調。（作者：優選資本  李芳 陳峰）